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荧光PCR冻干保护剂之甘油

日期:2020-08-03浏览:2983次

多元醇类冻干保护剂包括甘油、甘露醇、山梨糖醇、肌醇、木糖醇、叔丁醇、侧金盏花醇等,这一类冻干保护剂是比较常用较为普遍的冻干保护剂。以甘油作为冻干保护剂来介绍一下在蛋白质冻干中的作用。甘油具有良好的渗透能力,可以进入细胞内部和胞内大分子形成氢键以取代干燥脱除的水分,从而维持蛋白质、碳水化合物及脂肪等大分子活性物质的原有结构。此外,甘油还可以起到降低细胞脱水皱缩和缓解复水肿胀的效果。另外醇和糖类相似均具有醇和糖类羟基官能团,均能产生“优先水化作用”以及改变体系的玻璃态转变温度等,故在发挥保护效果方面和糖类具有一定共性。须知蛋白在使用时候存在冻融情况下建议可以选甘露醇、右旋糖酐40、蔗糖,另外40%-50%的甘油效果也很好。

PCR试剂冻干示例:

(1)将荧光PCR扩增缓冲液、引物、探针、热启动Taq酶、UNG酶、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、dUTP、冻干保护剂按照配方进行混合;

(2)冻干保护剂可选用:甘油、海藻糖、蔗糖、甘露醇、PEG、PVP、DTT、牛血清白蛋白、吐温100、甲酰胺、氨基酸等。

(3)将上述混合液灌装至PCR扩增管或者八联管中。

(4)进行冻干。(5)出仓进行测试。(6)配方修正。

 

 

 

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