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冷冻干燥机之常用制冷剂

2020-08-21

冷冻干燥机的制冷系统属于压缩式制冷,由制冷压缩机、冷凝器、蒸发器、膨胀阀等四个基本部件组成。它们之间用管道次连接,形成一个密闭的系统,制冷系统中的工作介质称为制冷剂,它是一种特殊液体,其沸点低,在低温下极易蒸发,当它在蒸发时吸收了周围的热量,使周围物体的温度降低;然后这种液体的蒸汽经压缩成为高温、高压汽体,在冷凝器中冷却变成液体,再将该液体降压节流到蒸发器中吸热,如此循环不断,便能使蒸发部位的温度不断降低,这样制冷剂就把热量从一个物体移到另一个物体上,实现了制冷的过程。为了制...

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脂质体及冻干

2020-08-20

脂质体作为高效的载体近年来在医药,化妆品,基因工程中广泛使用。脂质体混悬液在贮存期间容易发生聚焦、融合及药物泄露。怎样提高脂质体混悬液在贮存期间的稳定性呢,可以通过冷冻干燥法将脂质体冻干,降低磷脂和药物的水解和氧化速度。同时冻干保护剂也保持了脂质体膜的完整性。克服脂质体聚焦、融合及药物泄露不稳定因素。常用的冻干保护剂有单糖、二糖、寡聚糖、多糖、多元醇等。在做脂质体冻干前要加入适宜的冻干保护剂,采用优化好的冻干工艺,这样能尽量消除冻干对脂质体的破坏,保证复水后脂质体的形态,粒径...

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冻干保护剂之无水溶剂

2020-08-19

冻干保护剂需要具备四个特性:玻璃化转变温度高、吸水性差、结晶率低和不含还原基。按物质可分为糖类/多元醇,聚合物,无水溶剂,表面活性剂,氨基酸,盐和胺,其中无水溶剂包括乙烯乙二醇、甘油、DMSO、DMF等。例如选用甘油作为保护剂应用于冷冻保藏菌种。原理低温冷冻条件下,使微生物的新陈代谢趋于停止,从而达到长期有效的保藏。在选用甘油时,甘油终浓度一般为10%~20%。由于甘油原液太粘稠,需要配制合适的甘油-水溶液,将菌悬液与甘油以1:1的体积比充分混匀后,分装至提前灭菌好的保藏管中...

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冻干保护剂-冻干加速剂

2020-08-18

冻干保护剂按物质的种类分为糖/多元醇类,表面活性剂类,氨基酸类,缓冲剂,冻干加速剂等。例如冻干加速剂可降低干燥层阻力,从而加速干燥过程,缩短干燥时间;对于难溶于水的药品,可使产品具有较高的比表面积、好的外观,并易于复水,提高药品溶液和冻干品的稳定性,且有一定的抑菌作用。例如冻干加速剂之叔丁醇是一种小分子醇,与水*互溶,具有低毒性、高蒸汽压。在药液中的应用,叔丁醇-水共溶剂体系制备固体分散体可以使药物保持在无定型状态。另一方面,也可用来促进难结晶药物的结晶。这是因为,将其加入会...

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冷却循环水机的应用及特点讲解

2020-08-17

冷却循环水机是一种水冷却设备,能提供恒温、恒流、恒压的冷却水设备。其工作原理是先向机内水箱注入一定量的水,通过制冷系统将水冷却,再由水泵将低温冷却水送入需要冷却的设备,冷冻水将热量带走后温度升高再回流到水箱,达到冷却的作用。冷却水温可根据要求自动调节,长期使用可节约用水,是保证用户仪器设备正常工作的*设备。因此,冷却循环水机是一种标准的节能设备。它主要应用于:加速器、核磁共振及CT机、工业探伤、数控机床;电子显微镜、X光机、激光器、质谱仪、X射线衍射仪;各种真空泵、真空炉、激...

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冻干保护剂之脱脂奶粉

2020-08-17

脱脂奶粉是一种高分子复合保护剂,不论是单独使用还是与其他保护剂混合使用,均有较好的保护效果。因为在冷冻干燥时,乳清蛋白能在菌体外形成蛋白膜,对细胞加以保护,并可固定冻干酶类,且脱脂奶粉中其它成分也可提高菌体的冷冻干燥存活率,为冻干物提供轻而多孔的结构,增强菌粉的复水性。保护剂是如何制备的呢?预先把海藻糖、蔗糖、葡萄糖、麦芽糊精、D-山梨醇、甘油、谷氨酸钠、VC、脱脂奶粉、硫酸锰分别取出一定量溶解于无菌水中,再置于带塞玻璃瓶内灭菌30min。保护剂溶液用量为原发酵液10%。保护...

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冻干保护剂之抗氧化剂

2020-08-15

耐热冻干保护剂有免疫活性但无药理活性,可在冻干和保存时维持疫苗的稳定性,初次干燥时在适宜的温度下疫苗不倒塌,提高产品干燥能力并增大产品批次间的稳定性。冻干保护剂按功能和性质分为几大类,如抗氧化剂:一种是抗氧化剂的自身氧化,消耗冻干样品内部和环境中的氧,使冻干样品物料不被氧化;另一种使抗氧化剂给出电子或氢离子,阻断冻干样品中的氧化链式反应;还有一种方式是抗氧化剂通过抑制氧化的活性而防止冻干样品的氧化变质,如维生素E、维生素C、硫代硫酸钠、硫脲。保护剂筛选要求:配液后成均匀混悬液...

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荧光PCR保护剂之非离子表面活性剂

2020-08-14

非离子表面活性剂主要分为聚氧乙烯醚类、多元醇酯类、酰胺类以及嵌段聚醚类四种类型。非离子表面活性剂具有好的稳定性和相溶性,毒性和溶血作用小。不易受电解质和溶液的影响,能与大多数药物配合等。在药剂中已作增溶剂、乳化剂、助悬剂、抗氧剂、渗透剂、清洁去污剂、消毒防腐剂等使用。非离子表面活性剂是怎样应用的?一同了解下在微球剂中的应用。微球剂是一种将药物分散或包埋于多聚物中,形成粒径为微米级的球状载体给药系统,这类剂型的研究与开发,对于发展控释与靶向给药系统具有重要意义。其组成中的表面活...

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冻干保护剂及荧光PCR冻干

2020-08-13

干燥蛋白质药物时,保护剂紧密地包裹相邻近的蛋白质分子,形成一种在结构上与冰相似的碳水化合物玻璃体,由于私度较高,其扩散系数很低,蛋白质分子运动能力减某一蛋白质的保护作用通常有的使用浓度(或使用量),所以选择保护剂时还要合理选择使用量。常用的保护剂种类有多轻基化合物、糖、蛋白质、聚合物、氨基酸、盐、胺、表面活性剂等。多轻基化合物用作蛋白质的抗冻剂由来已久,常见的该类冻干保护剂有甘油、甘露醇、山梨醇、肌醇、硫醇、聚乙二醇等。甘油可促进冻干处理的过氧化氢酶复性,且随着甘油浓度上升至...

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盐类保护剂及药品冻干

2020-08-12

冻干保护剂按化学成分分为复合物、糖类、盐类、酸类、碱类、聚合物等。如盐类在冻干中的作用溶液在结冰时,其中的溶质浓度必然会慢慢增大,盐类产生的电解质离子可明显降低其Tg值,比如在10%的葡聚糖、PVP、乳糖和蔗糖的溶液中加入2%的NaCl可使Tg值下降14~18℃。磷酸钠对Tg值的影响较小,但是当将10%的PVP溶液中加入1%~%的磷酸钠可以引起在低温热能曲线中的玻璃化,暗示了在冻干液中的相分离。电解质诱导Tg值变化的可能的机制是它可以增加冻干液中非冰冻水的含量,而这非冰冻水起...

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冻干保护剂之填充剂

2020-08-11

填充剂能防止组分随水蒸汽一起升华逸散,如甘露醇、明胶等。填充剂在选择时要满足以下几点:有相当好的溶解性;与生物制品中活性组分相容;没有或者很小的毒性;以及具有较高共晶温度。甘露醇和甘氨酸就是两种常用填充剂。在生物制品配方中起到为终的冻干产品提供足够的机械支撑作用;改进冻干制品的外观;提高配方的溶解度;防止冻干制品发生塌陷和溢出容器。另外在做生物制品冻干前必须在溶液中加入填充保护剂,使之成形。在需冻干的溶液中加入适量胶体物质,可以防止冻结前溶液沉淀和冻干后发生破碎。可以使制品变...

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荧光PCR冻干及蛋白质类冻干保护剂

2020-08-08

常用的冻干保护剂种类有多轻基化合物、糖、蛋白质、聚合物、氨基酸、盐、胺、表面活性剂等。蛋白质类冻干保护剂可分为两种:一种是蛋白质药物自身,另一种为外来蛋白质。一些蛋白质经冻融后的活性直接和蛋白质的起始浓度有关,起始浓度升高有时会促进蛋白质的复性一种常用的外来蛋白质类保护剂为血清白蛋白,它是一个经典、优良的蛋白质稳定剂。例如,冷冻时,1%牛血清白蛋白可使溶液的活性不受损失;人血清白蛋白则在更低浓度(0.05%一0.1%)时也能有效阻止蛋白质表面的吸附,对冻干过程中多数蛋白都具有...

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冻干蛋白常用的赋形剂和保护剂

2020-08-08

赋形剂是在药物制剂中除主要以外的附加物,也可称辅料。是一种不发生化学反应的要用混合物,其中加入一种具有疗效的药物或者通过它使其他成分胶合在一起。在冻干蛋白中几种常用的赋形剂有葡萄糖、葡聚糖、甘露醇、山梨醇等。都起到什么作用呢?如葡聚糖具有较高的玻璃转化温度,能在酶蛋白分子周围形成玻璃态,从而保护酶分子免受高温所引起的损伤;甘露醇(20%-90%,w/w)作为载体可形成疏松结实的均匀骨架,改善了制剂产品的外观;山梨醇与甘露醇相似,一般作为赋形剂;乳糖加入冻干溶液中可增加体积,并...

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荧光PCR冻干保护剂之羟乙基淀粉

2020-08-07

冷冻保护剂可分为渗透性和非渗透性两类。渗透性冷冻保护剂可以渗透到细胞内,一般是一些小分子物质,主要包括甘油、DMSO、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等。非渗透性冷冻保护剂不能渗透到细胞内,一般是些大分子物质,主要包括聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白以及羟乙基淀粉等。其中羟乙基淀粉是淀粉衍生物,羟乙基淀粉制备的几种方法有水媒法制备、干法制备、溶媒法制备。羟乙基淀粉作为冷冻保护剂有什么作用呢?在红细胞中可以防止红细胞冷冻和溶解过程溶血,体内支链淀粉羟乙基化后...

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荧光PCR冻干保护剂之右旋糖苷

2020-08-06

右旋糖苷是聚合物类保护剂的其中一种,其保护剂还包括PVP,牛血清,聚乙二醇等。聚合物类保护剂的作用具有能提高生物制品混合液的玻璃化转变温度等。有些生物制品中会加入多种聚合物类保护剂。右旋糖苷是若干葡萄糖分子脱水的聚合产物,又叫葡聚糖。其常作为生物制品冷冻干燥的低温保护剂来选用。按分子量的不同,分为中分子和低分子及小分子等,以中分子右旋糖苷40为例介绍下其应用。其分子量在4000左右。用作药品冻干粉针剂的赋形剂在医药工业中广泛使用。右旋糖苷40的加入使药品形成均一蓬松的冻干块,...

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冻干工艺及优化-蛋白

2020-08-06

冷冻干燥作为蛋白类药物干燥常用的方法,能保持蛋白类药物的活性,干燥后能保持原形,体积几乎不变,冻干药品疏松多孔,呈海绵状,复水性好。药品脱水*能长期保存。想要冻干药品复水性好并且能长期保存,冻干工艺及优化很重要,例举几个方面如冷冻干燥过程中冻结中形成的冰晶形态和大小以及玻璃化程度不光影响干燥效率,还影响冻干药品的质量。在冻结过程中要考虑配方、冻结速率、冻结方式以及是否退火等问题。配方中如果固体含量少于2%,药品的性能就会不稳定,尤其在干燥过程中,药品微粒不能粘在基质上,溢出的...

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荧光PCR冻干之Tris

2020-08-05

Tris又叫三羟甲基氨基甲烷。是一种白色结晶或粉末,溶于乙醇和水,微溶于乙酸乙酯、苯,是一种有刺激性的化学物质。其本身有很高的缓冲能力,在水中溶解度高,对很多酶呈惰性反应,它的这一特性使得Tris成为用于许多生化目的非常满意的缓冲液。用于稳定反应体系的pH,在pH7.5-9.0之间有较强的缓冲能力。其缓冲液的低离子强度特点可用于线虫核纤层蛋白的中间纤维的形成。其本身也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一。此外还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间物。荧光PCR冻干体系优化...

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荧光PCR冻干保护剂之甘油

2020-08-03

多元醇类冻干保护剂包括甘油、甘露醇、山梨糖醇、肌醇、木糖醇、叔丁醇、侧金盏花醇等,这一类冻干保护剂是比较常用较为普遍的冻干保护剂。以甘油作为冻干保护剂来介绍一下在蛋白质冻干中的作用。甘油具有良好的渗透能力,可以进入细胞内部和胞内大分子形成氢键以取代干燥脱除的水分,从而维持蛋白质、碳水化合物及脂肪等大分子活性物质的原有结构。此外,甘油还可以起到降低细胞脱水皱缩和缓解复水肿胀的效果。另外醇和糖类相似均具有醇和糖类羟基官能团,均能产生“优先水化作用”以及改变体系的玻璃态转变温度等,...

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荧光PCR冻干之二糖

2020-08-02

二糖又名双糖,双糖是碳水化合物的一种。它是由两个单糖分子经缩合反应除去一个水分子而成的糖。例如乳糖由葡萄糖和半乳糖组成,蔗糖由葡萄糖和果糖组成,麦芽糖由两个葡萄糖组成等。二糖作为常用的冻干保护剂,能够有效增加蛋白冻干稳定性,但是用它们作保护剂得到的无定形蛋白冻干固体具有较低的Tg,对储存过程中的高温和高湿条件耐受较差。大分子量糖能够增加冻干后固体的Tg,增加冻干后稳定性,但是对于低浓度蛋白活性保护作用不理想。例如蔗糖对蛋白质具有保护作用,葡聚糖在冷冻和干燥过程中不能防止蛋白质...

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荧光PCR冻干之聚合物

2020-08-02

聚合物又称加聚物。由一种单体经聚合(加聚)反应而成的产物。分子具有重复的结构单位。包括晶态结构、非晶态结构、取向态结构以及织态结构。聚合物包括聚乙二醇、PVP、明胶、聚乙烯亚胺等。聚合物常用作为蛋白质的冷冻保护剂,通常聚合物的稳定作用取决于聚合物的多重性质,如优先从蛋白质表面析出、表面活性、使蛋白质溶液私度升高从而阻止其他小分子(如糖及多轻基化合物)的结晶、抑制冷冻过程中pH值的剧烈变化等。不同聚合度及浓度的聚合物所提供的保护作用不同,如聚合度大的PvP有着较高的玻璃化温度,...

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荧光PCR冻干之氨基酸

2020-08-01

氨基酸是含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称。目前发现的天然氨基酸就有300多种,基本氨基酸也有二十个品钟。氨基酸应用于食品行业、医药行业、化妆品行业等。氨基酸是常见的蛋白质保护剂之一。在冷冻过程中,低浓度的甘氨酸可通过抑制10或100mmol/L磷酸缓冲盐结晶所致pH值的改变而阻止蛋白质药物变性。无定型甘氨酸可阻止冻干过程中重组人生长激素的聚集;结晶型甘氨酸能升高成品的塌陷温度,阻止因塌陷而引起的蛋白质药物的破坏。常用的氨基酸类蛋白质保护剂有脯氨酸、谷氨酸钠、丙氨酸、甘氨酸...

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荧光PCR之探针法

2020-07-28

荧光PCR的探针法分为全基因组核酸探针、克隆探针、寡核苷酸探针、单链RNA探针、cDNA探针、蛋白质探针以及酶探针。带大家一起了解下寡核苷酸探针、cDNA探针、RNA探针的特点。寡核苷酸探针特异性较高,区别染色体上一个碱基的突变;由于其链短,分子量小,杂交时间较短(仅需1-2小时),可预测杂交条件,可直接利用DNA序列人工合成获得特异片段而无需分子克隆,获得探针相对容易。但是由于其链短致使标记率较低,也影响了检测的敏感性,仅能检出含很少的标本。cDNA探针以RNA为模板,用反...

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荧光PCR冻干之DMSO

2020-07-27

二甲基亚砜(DMSO)是一种有机化合物,常温下为无色无臭的透明液体,是一种吸湿性的可燃液体。具有高沸点、热稳定性好、与水混溶的特性。可作有机溶剂、反应介质和有机合成中间体。也可用作合成纤维的染色溶剂、去染剂、染色载体,以及回收乙炔、二氧化硫的吸收剂。二甲基亚砜是一种既溶于水又溶于有机溶剂。广泛用作溶剂和反应试剂,具有很高的选择抽提能力。二甲基亚砜是如何应用的呢?下面简单介绍下,DMSO是一种重要的渗透型细胞保护剂。培养液中DMSO浓度为10%时,细胞生长抑制率近100%;1‰...

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荧光PCR冻干保护剂之甲酰胺

2020-07-26

甲酰胺是一种化合物,无色透明液体,略有氨味,是合成医药、香料、染料等的原料,也可作为溶剂用于合成纤维的抽丝、塑料加工、木质酪素墨水的生产等。通过甲酸甲酯和氨的反应制备甲酰胺的方法。甲酰胺是可作为溶剂、有机合成原料、医药原料等的在工业上有用的物质。甲酰胺是被较早发现并应用的PCR冻干保护剂之一,能促进引物模板退火,能提高PCR反应的特异性。分享下荧光PCR试剂冻干的示例:(1)将荧光PCR扩增缓冲液、引物、探针、热启动Taq酶、UNG酶、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、...

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荧光PCR冻干之PVP

2020-07-25

聚乙烯吡咯烷酮简称PVP,是一种非离子型高分子化合物,是N-乙烯基酰胺类聚合物中被研究得深、广泛的精细化学品品种。应用于医药、化妆品、食品等行业。可做粘合剂、增溶剂、分散或共研磨剂、活性成分稳定剂等。PVP按其平均分子量大小分为四级,用K值表示,K值实际上是与PVP水溶液的相对粘度有关的特征值,而粘度又是与高聚物分子量有关的物理量,一般K值越大,其粘度越大,粘接性越强。荧光PCR冻干时,PVP能够增强PCR产物生成量,其中PVP也能有效提高PCR效率和特异性。PVP作为PCR...

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