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荧光PCR冻干之PVP

2020-07-25

聚乙烯吡咯烷酮简称PVP,是一种非离子型高分子化合物,是N-乙烯基酰胺类聚合物中被研究得深、广泛的精细化学品品种。应用于医药、化妆品、食品等行业。可做粘合剂、增溶剂、分散或共研磨剂、活性成分稳定剂等。PVP按其平均分子量大小分为四级,用K值表示,K值实际上是与PVP水溶液的相对粘度有关的特征值,而粘度又是与高聚物分子量有关的物理量,一般K值越大,其粘度越大,粘接性越强。荧光PCR冻干时,PVP能够增强PCR产物生成量,其中PVP也能有效提高PCR效率和特异性。PVP作为PCR...

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荧光PCR冻干保护剂之蔗糖

2020-07-24

蔗糖是由葡萄糖和果糖通过异构体羟基缩合而成的非还原性二糖。蔗糖极易溶于水其溶解度随着温度的升高而增大。蔗糖的化学性质稳定,多呈无定型结构,对阻止蛋白质二级结构改变、冻干处理过程中,贮藏期内蛋白质的伸展和聚集起重要的作用。糖对蛋白质保护作用大小有时和其浓度有关,通常在某个浓度范围内糖的保护作用随着浓度的升高而增大;当达到某一浓度时保护作用达到大值,而此后再增大糖的浓度则保护效果不再显著增加,有时反而会降低。在冻干时,其中蔗糖海藻糖等双糖对一些蛋白质均能显示出良好的保护作用,具备...

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荧光PCR冻干保护剂之海藻糖

2020-07-23

海藻糖又称漏芦糖、蕈糖等,是一种通过生物发酵技术从玉米、木薯等淀粉获得的安全、可靠的天然糖类。海藻糖在食品以及医药生物制品方面等广泛应用。海藻糖是怎么应用的呢?在食品中作为添加剂来改善干燥食品的质量和风味。在医药生物制品方面海藻糖因其具有高玻璃化转变温度和低吸湿性等特性,对实现蛋白等生物药品的玻璃化冻结起重要作用,既是有效的低温保护剂又是很好的冻干保护剂。海藻糖作为荧光PCR冻干保护剂的其中一种,在冻干中的应用:既能在冷冻过程中充当低温保护剂,又能在干燥脱水过程中起到脱水保护...

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荧光定量PCR的优点

2020-07-21

普及一下荧光定量PCR的几个优点:1、使用特异性探针对定量分子进行识别,具有很高的准确性。同时靶序列由引物和探针双重控制,特异性好、假阳性低。2、荧光PCR检测技术是综合了PCR技术、荧光标记技术、激光技术、数码显象技术为一体的技术,因此检测灵敏度高。3、荧光信号的产生和每次扩增产物成一一对应的关系,通过荧光信号的检测可以直接对产物进行定量;定量范围可在0-1010拷贝/毫升。4、扩增和检测可以在同一管内检测,一步完成,不需要开盖,不易污染。5、速度快、高通量,可在2-3小时...

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荧光PCR冻干保护剂-叔丁醇

2020-07-19

叔丁醇被大家认为是适合制剂的冻干溶剂。有如下特点:凝固点高,纯的叔丁醇在室温下(25℃)就可以冻结。叔丁醇的蒸汽压较高有利于升华,节省冻干时间。叔丁醇毒性低,在冻干过程中,大部分叔丁醇可在一次干燥阶段升华,在制剂中残留量很低。叔丁醇自身在冻结中形成针状结晶,能改变溶质的结晶方式,利于升华。叔丁醇也可在荧光PCR试剂当冻干保护剂使用。叔丁醇起到加快冻干进程和改善冻干微观结构的作用。冻干前的荧光PCR反应混合物原液中的浓度范围为:叔丁醇的浓度为10%-40%(v/v)。荧光PCR...

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荧光PCR冻干保护剂筛选方法

2020-07-19

荧光PCR冻干体系筛选范围:糖类、醇类、氨基酸类、聚合物类、大分子蛋白、无机盐类等,其组分为其中的几种的组合。优化方法:没有经验采用单一因素法,有一定经验的采用多因素法。单一因素法筛选出保护效果比较好的保护剂,再将保护效果好的保护剂进行组合,产生终配方。因此,初步筛选采用单因素法,进一步筛选采用多因素法。我们不但能提供适合荧光PCR冻干的试剂冻干机Pilot10-15T,还能为用户提供对药品、诊断试剂、蛋白、多肽、酶、抗体、抗原等进行冻干工艺优化,包括保护剂优化、冻干曲线优化...

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荧光定量PCR实验时的好方法

2020-07-18

实时荧光定量PCR技术实现了PCR从定性到定量的飞跃,具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,成为核酸分子定量的标准方法。在做荧光定量PCR实验时建议使用这些耗材:96孔光学反应板配合光学膜,0.2ml光学八联反应管配合光学膜,0.2ml光学八联反应管配合平盖的光学八联管盖等。在做荧光定量PCR实验时有一些好的方法分享给大家,例如在使用单管或者8连管做实验时,如果在样本数量不多的时候,建议在样品加热块(TRAY)上对称的安放样品,并且先放在第6列或者第7列...

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实时定量PCR之定量

2020-07-17

实时定量PCR不仅操作简便、快速高效,而且具有很高的敏感性和特异性。广泛地运用于分子生物学的各个领域。实时定量PCR在应用中有一些使用人对定量的方法上觉得存在着不容易克服的问题主要包括1.定量的方法与众多因素有关,如水、缓冲液、仪器性能等,乃至于核酸的抽提过程都会影响到结果的稳定性。2.标准品的稳定保存很难获得成功,高浓度的核酸物质易于被降解,而每次配制新的标准品又会增加批间差异。3.每次测定样本都要同时测定标准品,而热循环仪的样本孔有限,所以在单批内不能测定更多的样本,这样...

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冻干荧光PCR试剂之反应管

2020-07-15

冻干荧光PCR试剂冻干方法是将荧光PCR试剂经过预冻,在真空状态下进行升华,后可制备成冻干粉。冻干荧光PCR试剂时,选用的反应管在做冻干时有许多不足之处:1.由于反应管呈上宽下窄的锥字形,还需要借助其他工具支撑,这样反应管试剂与冻干机搁板的接触面积很小,升华时传热会受到限制,延长了预冻和升华的时间,反应管中的冻干程序一般在24~30小时,冻干制品日产量很低。2.反应管中的冻干,在加入冻干混合试剂后,需要进行离心处理,排出气泡,并将粘附在反应管壁上的试剂离心下来。3.反应管中的...

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荧光定量PCR的效率值

2020-07-15

荧光定量PCR的效率值可通过标准曲线获取。理想的反应效率为100%。效率较高(高于110%)一般说明反应过程中存在抑制作用。引起抑制作用的原因主要是RAN或者DNA质量较差,模板浓度过高及含有核酸钝化的残余物。反应效率较低(低于90%)的原因有试剂浓度不适(主要是引物、镁、Taq、DNA、聚合酶、尤其是在多重试验中)。造成效率低的其他因素有引物Tm之间的差异超过5℃或者是热循环条件不适。抑制作用和较低的效率会影响分析的灵敏度,导致动态范围减小及通用性降低。怎样解决呢?可在做冻...

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浅谈荧光PCR冻干芯片的方法

2020-07-14

荧光PCR冻干芯片的制备方法简单快速,易于操作,缩短冻干所需时间,一般可在八小时内完成冻干步骤。荧光PCR冻干芯片的制备方法示例,1.先要称取制备冻干保护剂如海藻糖、棉子糖、右旋糖酐、甘油、焦磷酸二乙酯处理过的水,置于容器中混合均匀,然后加热至*溶解,在放入2~8℃冷却。2.预混荧光定量PCR试剂如将PCR反应缓冲液、引物、探针、dNTPs和DNA聚合酶混合均匀;将预混的荧光定量PCR试剂和冻干保护剂混合均匀(体积比为3:1),制备成冻干试剂;取5~8μL的冻干试剂点在微流控...

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荧光探针和荧光染料冻干防护

2020-07-12

冻干对荧光探针和荧光染料有防护作用,冻干可防止探针和染料降解,提高反应的灵敏度和特异性。接着介绍一下荧光探针和荧光染料的特性。荧光探针是PCR扩增时在加入一对引物的同时加入荧光探针,探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成*同步。荧光染料是在PCR反应体系中,加入...

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这就是单效外循环浓缩器的原理的吧,这篇文章读完就感觉不错

2020-07-09

单效外循环浓缩器对溶液进行蒸发浓缩时,在中药提取、生物医药产品的提取过程中应用尤其之多。单效浓缩器应用于化工、医药、废水处理行业中,批量小,品种多的真空浓缩过程中。单效外循环浓缩器原理是利用外加热自然循环与真空负压蒸发结合的方式,将溶液进行蒸发浓缩,将溶剂和溶液进行分离。生蒸汽进入加热室,将料液加热上升,从喷管喷入蒸发室,进行气液分离,其料液从循环管回到加热室下部再进行加热,料液受热后又喷入蒸发室开成循环。当进入的料液浓缩到一定程度,自控仪表检测反馈后,由出料口出料,蒸发室蒸...

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中试冻干机制品升华干燥要点

2020-07-07

制品在冻干过程中的升华干燥,分为一次干燥和二次干燥。一次干燥的要点,当冻干箱内的压力降到60Pa(根据制品特点而定)以下,就可以给制品加热,为制品升华提供能量,制品升华的速度由加热能力和冷阱的捕水能力而定。但冻干箱的压力必须维持在允许的高压力以下,板层的温度在一次升华不要超过共溶点。可以通过以下现象断定一阶段干燥结束:1.干燥层和冻结层的交界面到达瓶底并消失。2.产品温度上升到接近板层的温度。3.冻干箱的压力且维持不变。上述现象发生后,至少再延长0.5~1小时,以*除制品中的...

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制药冻干机的性能要求

2020-07-04

制药冻干机要具备安全性、可靠性、适用性。在选择制药冻干机时要满足以下几点性能要求。1.冻干机箱体内部要采用大圆角设计,表面采用镜面抛光,箱体底部采用倾角设计,要符合FDA及GMP要求。2.冷阱要采用外置盘管,冷阱内要光亮*,避免二次污染及交叉污染。3.要采用立式冷阱快速的热水浸泡除霜,缩短间歇时间。4.干燥箱与冷阱要采用分体式结构,实现无菌隔离。5.系统密封性要好,极限真空度要≤1Pa。6.系统要有低温进箱、二次回冻(反复预冻)、自动进气和压塞、低温出箱的功能。7.要有回填控...

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原位冻干机的特点及应用

2020-06-27

原位冻干机是介于小型实验室冻干机和中试冻干机之间的一款机型。原位冻干机为立式,可原位预冻,减少冻干制品的污染,冻干速度快,捕水量大,0.2平米的原位冻干机冻干时间一般为15-18个小时。板层可独立控温,冻干制品的均一度较好,有全自动程序,可设置完整的冻干曲线,通过冻干曲线可随时查询温度及真空度曲线。方便工艺优化及冻干验证。选择原位冻干机比较适合预算成本相对较低且性能又要高于小型实验室冻干机的用户。原位冻干机应用于食品、生物研究、化工、制药、医学等行业。博医康原位冻干机Pilo...

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板层温度及平整度的重要性

2020-06-22

在选用冻干机时板层温度均匀性及平整度是重要因素之一。板层温度均匀性和平整度越好,冻干样品的质量也就越好。如生产型冻干机板层保持高平整度要求,尤其是大板层保持高平整度要求更难。板层制作常见的方法有:打孔塞焊法、L型焊法、真空钎焊法。这些方法都是成熟的板层制作方法。无论采用哪种制作方法,想保持板层内外平整,流道阻力小,都要付出高额的制作加工代价。同样尺寸大小的一块板层,高精度加工的成本是普通加工成本的十几倍。这也是生产型冻干机造价高的原因之一。生产型冻干机LYO-15特点:箱体设...

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PAT技术及应用

2020-06-19

PAT即过程分析技术,作为生产过程的分析和控制,应用于医药、化工和制药等行业。PAT技术大致分为:多变量数据获得和分析工具,工艺过程分析工具,工艺过程、终点检测和控制工具,持续性改进和信息管理工具。PAT技术在制药行业的应用通过在线分析、监测,控制缓冲液的质量,保证缓冲液的各检测指标的精确与稳定。确保了层析工艺过程的稳定性和可重复性。PAT技术代表冻干设备制造水平。选购冻干机,尤其是高要求冻干机要具备PAT过程控制分析功能。PAT技术对设备结构的要求:1.双仓水平结构。2.箱...

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小试及中试

2020-06-17

中试是小试到生产*的环节,确保生产出质量标准的生产品,小试主要是从事探索以及开发性的工作,使各项指标都达到预期要求,这时可以转到中试阶段,中试不光是规模扩大,主要是完成小试的全流程,达到小试的各项指标。进行中试时先要达到小试的工艺考察已完成,已确定对成品的精制、结晶、分离、干燥的方法和要求。进行至少是3-5批的小试,确定工艺可行,稳定,还有进行必要的材质腐蚀性的实验。中试放大是药品研发到生产的必经之路,也是降低生产风险的有效措施。博医康冻干机满足小试、中试及生产,Pilot3...

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冻干机日常保养重点

2020-06-14

冻干机在日常使用中重要的几点保养如下:1.冻干机在工作200小时要更换真空泵油,换油的时候,要把旧油排空,加入新油,让真空泵运行40分钟后,再排空,加入的新油洁净为止。2.清洗水凝器更换制冷系统一次干燥过滤器滤芯,建议1年更换1次。3.检查压缩机低压缸结霜情况,如果必要对膨胀阀进行调节。4.温度探头校验,确保能精准控制冻干过程,减少能耗。5.检查隔膜阀,如有损伤需进行更换。6.压力控制器调整、更换,水环泵要除垢清洗。以上保养方法是以博医康LYO-10冻干机为例。冻干机特点:带...

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玻璃态转化温度

2020-06-12

玻璃态是处于非晶态或者是无定形态的大分子聚合物的链段运动被冻结,只可以在小尺度的空间运动,形变很小,像坚硬的玻璃。玻璃态在食品中具有重要的意义如对食品的机械特性、物理和化学的稳定性等。玻璃态在食品冻干中应注意食品中的冰*升华完毕后,升华界面消失时,这时就进入了二次干燥,剩余的水分是未结冰的水分,此时要注意加温时不能太快,会导致食品的固态结构瘪塌,实际上食品的瘪塌温度就是玻璃态转化温度。玻璃态转化温度的测定方法有DSC法、DTA法、低温显微镜直接观察法,常用的还是DSC法。博医...

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诊断试剂工艺流程及要点

2020-06-08

IVD中文含义即体外诊断产品。IVD主要包括体外诊断的仪器、试剂或系统。近些年IVD行业在我国发展迅速,主要是分子诊断的兴起,分子诊断试剂主要有临床已经使用的核酸扩增技术(PCR)和基因芯片产品。试剂冻干一般采用西林瓶、八连管、异型管、冻干微芯等。酶联免疫试剂工艺流程及工艺流程重要点:工艺流程:1.包被液的配制2.酶标板的包被3.酶标板封闭4.酶标板的干燥、包装。工艺流程重要点:液体配制过程物料量取准确;确认配制试剂的相关信息(名称、批号、批量等);控制液体分装量范围,应满足...

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生物发酵罐有什么特点?各方面表现如何?你了解吗?

2020-06-08

生物发酵罐应用于有机肥、农药、兽药、食品、化学品、生物肥、养殖业发酵饲料的混合发酵等,还特别适用相对粘稠的物料混合恒温发酵。主要用于处理猪粪、鸡粪、牛粪、羊粪、菌菇渣、中药渣、作物秸秆等有机废弃物,快速完成无害化处理过程,具有占地面积小,无空气污染。生物发酵罐普遍适用于各类科研院所、各类院校及各企事业单位的教学、科研或生物试验,是精密发酵试验的理想工具之一。适用于教学试验模拟、发酵培养基配方的筛选、发酵工艺参数的确定或验证。生物发酵罐主要特点1、整体式结构,个性化设计,结构紧...

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冻干蛋白的作用及方法

2020-06-07

蛋白的主要营养成分有蛋白质、脂肪、碳水化合物、钙、核黄素、磷等。蛋白的保存是根据对活性的要求以及蛋白的种类给定的。例如抗体是一种具有稳定结构的蛋白,要求具有活性的蛋白,根据需要小量保存,不同温度保存时间也不同,例如-20℃保存一个月,-80℃保存六个月,需要长期保存冻干是很好的保存法。但是冻干也会造成蛋白部分活性部分损失,聚集和其他变性问题,可以通过添加保护剂和控制冻干的条件来尽可能的降低蛋白部分活性的损失。下面简单介绍一下如何冻干,在冻干之前,把需要冻干的制品分装在合适的容...

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酵母菌的保存及冻干法

2020-06-04

酵母菌细胞里含有丰富的蛋白质和维生素,可以做成营养品添加到食品中或做饲养动物的饲料等。酵母菌的保藏方法有两种,一种是酵母菌保存于含有一定比例的甘油培养基中,在低温或液氮中保存。另外一种是将酵母中加入脱脂奶粉等保护剂,进行冻干保存。酵母菌的用途主要在食用中可做食品及果蔬的添加剂,在婴儿食品及健康食品中可做为营养强化剂。药用中在酵母的培养过程中,添加一些特殊元素制成含硒,铬等微量元素的酵母,对一些疾病有一些疗效。在饲料中能促进动物的生长发育,改善肉质,增强禽畜的抗病能力。菌种的冷...

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