菌种的保存真空冷冻干燥法

菌种的保存真空冷冻干燥法

1准备用于真空冷冻菌种保藏的安培管宜采用中性玻璃制造，先用2%盐酸浸泡8~10h,再经自来水冲洗多次,用蒸馏水涮洗2~3次,烘干;在每管内放入打好菌号及日期的标签,字面朝向管壁,管口塞好脱脂棉塞,121℃下高压灭菌20分钟备用。

2准备菌种用真空冷冻干燥法保藏的菌种用菌种纯度要高,而且菌龄要适宜。一般细菌的菌龄要求24~48h;酵母菌为3d;形成孢子的微生物则宜保藏孢子;放线菌和丝状真菌菌龄为7~10d。

3保护剂的选择和准备选取新鲜牛奶作为保护剂,牛奶要先脱脂,用离心方法去除上层油脂,115℃下高压蒸汽灭菌25min,备用。

4菌种准备及分装菌种要求为生长良好的纯种,菌龄以处于稳定期为好,孢子是新鲜的。每支长好的斜面加2~3ml保护剂,用接种环将菌苔轻轻刮起。如用液体培养的菌种,则需经离心收集和用灭菌生理盐水洗涤细胞,收集的菌体用保护剂悬浮制成菌悬液。

5 预冻-80℃冰箱预冻1~2小时。

6冷冻干燥将冷冻后的样品安瓿管置于冷冻干燥机的干燥箱内,开始冷冻干燥,时间一般为8-20小时。

7封口抽真空干燥后,取出安培瓶,接在封口用的玻璃管上,可用L形五通管继续抽气,约10min即可达到26.7Pa(0.2mmHg。于真空状态下,以煤气喷灯的细火焰在安培管颈中央进行封口。

8保藏安瓿管保藏在-20℃冰箱里。