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荧光PCR之探针法

日期:2020-07-28浏览:3983次

荧光PCR的探针法分为全基因组核酸探针、克隆探针、寡核苷酸探针、单链RNA探针、cDNA探针、蛋白质探针以及酶探针。带大家一起了解下寡核苷酸探针、cDNA探针、RNA探针的特点。寡核苷酸探针特异性较高区别染色体上一个碱基的突变由于其链短分子量小杂交时间较短仅需1-2小时),可预测杂交条件可直接利用DNA序列人工合成获得特异片段而无需分子克隆获得探针相对容易。但是由于其链短致使标记率较低,也影响了检测的敏感性仅能检出含很少的标本。cDNA探针RNA为模板,用反转录酶合成单链cDNA探针主要用来分离cDNA文库中相应的基因。RNA探针一般是单链,具有单链DNA探针的优点,又具有RNA:DNA杂交体比DNA:DNA杂交体有更高的稳定性,所以在杂交反应中RNA探针比相同活性的DNA探针所产生信号要强。荧光定量PCR类产品的组成方式通常为:1管反应缓冲液+1管酶的形式。其中反应缓冲液包含荧光PCR反应缓冲系统、引物、探针、dNTP;酶包含Taq酶、UNG酶。这种形式的产品使用方法复杂,必须先将反应缓冲液和酶按照比例混合均匀后,分装至PCR扩增管中,然后再加入样本。由于酶的用量通常较少(≤0.5μL)、酶液较粘稠,且配制过程繁琐,配制误差较大、反应重复性不好。荧光PCR冻干的试剂冻干机Pilot5-8T技术要点:

  1. 完整的PAT控制技术,可对冻干过程进行完整的控制和分析监控。包括预冻全过程控制、预冻结束判定、升华全过程控制、升华结束判定、解析全过程控制及冻干结束判定。
  2. 板层温度均一度±1℃。
  3. 系统极限真空度±1Pa
  4. 系统真空泄露率<3Pa.L/S
  5. 外界干扰热量屏蔽。
  6. 共晶点测试仪助力工艺开发。

      7.全进口配件

 

 

 

 

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