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荧光探针和荧光染料冻干防护

日期:2020-07-12浏览:1572次

冻干对荧光探针和荧光染料有防护作用,冻干可防止探针和染料降解,提高反应的灵敏度和特异性。接着介绍一下荧光探针荧光染料的特性。荧光探针PCR扩增时在加入一对引物的同时加入荧光探针,探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成*同步。荧光染料是在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料非特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加*同步。SYBR仅与双链DNA进行结合,因此可以通过溶解曲线,确定PCR反应是否特异。低温预冻,低温真空干燥,过程隔离氧气水分,冻干法可*防止荧光物质降解。试剂冻干机Pilot3-6T IVD方面应用示例(荧光PCR):

  1. 探针、底物、引物原料要求确定。
  2. 冻干溶液配方开发,采用正交法或响应曲面法进行辅料筛选。
  3. 选择适合的包材和模具。
  4. 设计冻干曲线配合辅料筛选。
  5. 确定配方及工艺。
  6. 稳定性测试。
  7. 根据稳定性测试结果修正工艺或配方。
  8. 整个环节注意环境、设备、人员的结合。

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