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荧光探针和荧光染料冻干防护
日期：2020-07-12浏览：1254次
冻干对荧光探针和荧光染料有防护作用，冻干可防止探针和染料降解，提高反应的灵敏度和特异性。接着介绍一下荧光探针和荧光染料的特性。荧光探针是PCR扩增时在加入一对引物的同时加入荧光探针，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成*同步。荧光染料是在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料非特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加*同步。SYBR仅与双链DNA进行结合，因此可以通过溶解曲线，确定PCR反应是否特异。低温预冻，低温真空干燥，过程隔离氧气水分，冻干法可*防止荧光物质降解。试剂冻干机Pilot3-6T IVD方面应用示例（荧光PCR）：
- 探针、底物、引物原料要求确定。
- 冻干溶液配方开发，采用正交法或响应曲面法进行辅料筛选。
- 选择适合的包材和模具。
- 设计冻干曲线配合辅料筛选。
- 确定配方及工艺。
- 稳定性测试。
- 根据稳定性测试结果修正工艺或配方。
- 整个环节注意环境、设备、人员的结合。
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